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熒光定量PCR儀的熒光擴增曲線可以分成三個階段
點擊次數(shù):2273 更新時間:2022-08-22
  熒光定量PCR儀所用到的實時熒光定量PCR技術(shù)是通過對PCR擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測,而實現(xiàn)對起始模板定量及定性分析的目的。在實時熒光定量PCR反應(yīng)中,引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì),隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖,達(dá)到監(jiān)測PCR產(chǎn)物擴增量的目的。
  一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段、熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化;而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,因此根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出起始DNA拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段,PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,故選擇該階段進(jìn)行定量分析。為了較方便的進(jìn)行DNA拷貝數(shù)的定量,在實時熒光定量PCR技術(shù)中引入了三個非常重要的概念:基線、熒光閾值和Ct值。
  熒光定量PCR儀的實時熒光定量PCR技術(shù)是DNA定量技術(shù)的一次飛躍。運用該項技術(shù)我們可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量和定性分析。定量分析包括絕對定量分析和相對定量分析。前者可以得到某個樣本中基因的拷貝數(shù)和濃度;后者可以對不同方式處理的兩個樣本中的基因表達(dá)水平進(jìn)行比較。
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